问题标题:
【实验做的RT-PCR,不知道问什么总是出不来结果,曲线杂乱无章.是什么原因呢?用的是探针法,引物、Taq酶和dNTP什么的都是没问题的,只是FAM长期冻融什么的,是不是作用降低了呢,是不是这个原因呢?】
更新时间:2024-05-03 13:56:48
问题描述:

实验做的RT-PCR,不知道问什么总是出不来结果,曲线杂乱无章.是什么原因呢?

用的是探针法,引物、Taq酶和dNTP什么的都是没问题的,只是FAM长期冻融什么的,是不是作用降低了呢,是不是这个原因呢?

李婷回答:
  1曲线的趋势是什么如果没有任何章法,说明试验不成功   2模板有没有问题   3逆转录   4怀疑是荧光探针的问题你可以跑一下电泳看看
李石山回答:
  恩,今天跑了电泳,没有扩增成功,明天想换整套试剂从新做一遍。曲线在前三次试的时候是毫无章法的,但是到第四次的时候呈现出一定的上扬趋势,但是荧光信号出现的比平常晚了六七个循环。模板应该没有问题的,不是逆转录,是直接拿来的质粒进行扩增的。
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